细胞培养

细胞培养（Cell Culture）：在体外模拟体内环境（37℃、5% CO₂、95% 湿度），维持细胞生长增殖的技术体系。

【分类】 按来源分原代培养（直接分离、代数有限）与细胞系（可长期传代）；按方式分贴壁培养（需消化传代）与悬浮培养（直接稀释传代）。

【核心技术要点】

1. 无菌操作：超净台提前 UV 消毒 30 min，操作前以 70% 乙醇喷洒台面与手套，一次只操作一种细胞系，防止交叉污染；
2. 培养基：以 DMEM/RPMI-1640 加胎牛血清（FBS）为主，新批次血清须支原体检测阴性后再分装冻存；
3. 传代时机：贴壁细胞长至 80–90% 汇合时，PBS 洗涤后以 0.25% 胰酶 - EDTA 消化，镜下见细胞变圆、间隙增大即加含血清培养基终止；
4. 支原体防控：肉眼不可见、经气溶胶传播，需定期 PCR 筛查，污染培养物直接高压灭菌废弃；
5. 冻存复苏：10% DMSO + 90% FBS 梯度降温入液氮；复苏时 37℃水浴快速解冻、立即换液去除 DMSO；
6. 质量控制：台盼蓝计数测活力、定期 STR 鉴定、持续监测形态与汇合度。

【要点总结】 预防优于补救：严格无菌、源头验血清、定期查支原体、污染即弃。