细胞增值检测

一、定义

细胞增殖检测主要是通过各种方法来评估细胞数量的增加、细胞周期的进程以及细胞生长状态等，以了解细胞的增殖能力。

二、检测方法

1. MTT法

   • 原理：MTT（3 - （4，5 - 二甲基 - 2 - 噻唑） - 2，5 - 二苯基 - 2 - H - 四氮杂）是一种黄色的化合物，活细胞的线粒体中的琥珀酸脱氢酶能够将MTT还原为不溶于水的紫色结晶甲瓒（Formazan）。甲瓒的生成量与活细胞数量呈正比，通过测定吸光度（一般在570nm波长）就可以反映细胞增殖情况。

   • 优点：操作相对简单，成本较低，适用于大规模的细胞增殖检测实验。

   • 缺点：需要使用有机溶剂（如二甲基亚砜）来溶解甲瓒，可能会对细胞产生一定的毒性，且不能用于检测贴壁细胞的动态增殖过程。

2. CCK - 8法

   • 原理：CCK - 8试剂中含有WST - 8（2 - （2 - 吡啶基） - 5 - （4 - 苯氧基） - 3H - 苯并噻唑 - 3 - 酮），活细胞的线粒体中的脱氢酶能够将WST - 8还原为橙黄色的甲瓒。与MTT相比，WST - 8更易溶解，不需要额外的溶解步骤。

   • 优点：灵敏度高，对细胞的毒性小，操作方便，适合检测贴壁细胞和悬浮细胞的增殖。

   • 缺点：价格相对MTT较高。

3. 流式细胞术检测细胞周期

   • 原理：利用荧光染料（如碘化丙啶PI）对细胞的DNA进行染色，通过流式细胞仪检测细胞内DNA含量的变化来分析细胞周期的各个阶段（G0/G1期、S期、G2/M期）。细胞在不同的周期阶段，DNA含量不同，G0/G1期细胞DNA含量为2n，S期细胞DNA含量在2n - 4n之间，G2/M期细胞DNA含量为4n。

   • 优点：可以精确地分析细胞周期分布，同时还可以结合其他荧光标记的抗体等检测细胞表面或内部的其他标志物，获取更多的细胞信息。

   • 缺点：仪器设备昂贵，需要专业的技术人员进行操作和数据分析。

4. 细胞计数法

   • 原理：通过直接计数细胞数量来评估细胞增殖。可以使用血细胞计数板在显微镜下人工计数，也可以使用自动细胞计数仪。

   • 优点：直观，成本低，操作简单。

   • 缺点：人工计数效率低，容易出现人为误差；自动细胞计数仪虽然提高了效率，但对细胞碎片等的区分能力有限，可能会导致计数不准确。

细胞增殖检测方法的选择需要根据实验目的、细胞类型、实验条件等因素综合考虑。