RNA提取

一、按样本类型分类

1. 动物组织RNA提取

   • 特点：动物组织通常含有丰富的蛋白质、酶和脂质，这些成分可能会降解RNA或干扰提取过程。

   • 常用方法：

     • 酚 - 氯仿抽提法：适用于需要高纯度RNA的实验，但操作复杂，需要使用有毒的有机溶剂。

     • 商业试剂盒法：如Qiagen的RNeasy Mini Kit，操作简便，适合高通量提取，提取的RNA纯度较高。

     • Trizol试剂法：Trizol试剂（也称为RNA提取液）是一种含有苯酚和异硫氰酸胍的单相溶液，可以同时提取RNA、DNA和蛋白质。通过离心分离不同相，RNA位于上层水相中，适合提取总RNA。

2. 植物组织RNA提取

   • 特点：植物组织含有大量的多糖、酚类化合物和次生代谢产物，这些成分会干扰RNA提取和纯化。

   • 常用方法：

     • CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）可以去除多糖和蛋白质，适合提取植物组织的总RNA。

     • 改良Trizol法：在Trizol试剂中加入多糖去除剂（如LiCl），可以提高RNA的纯度。

     • 商业试剂盒法：如Qiagen的RNeasy Plant Mini Kit，针对植物组织优化，操作简便，适合高通量提取。

3. 微生物RNA提取

   • 特点：微生物细胞壁结构复杂，需要先破坏细胞壁才能释放RNA。

   • 常用方法：

     • 碱裂解法：适用于细菌，通过碱性条件裂解细胞，释放RNA。

     • 机械破碎法：如使用玻璃珠或陶瓷珠进行剧烈震荡，破坏细胞壁，释放RNA。

     • 商业试剂盒法：如Qiagen的RNeasy Mini Kit，适合提取细菌、酵母等微生物的RNA。

4. 血液RNA提取

   • 特点：血液中含有大量的RNA酶，容易降解RNA，且含有血红蛋白等成分，会干扰RNA提取。

   • 常用方法：

     • Trizol试剂法：适合提取血液中的总RNA，但需要优化操作步骤以去除血红蛋白等杂质。

     • 商业试剂盒法：如Qiagen的RNeasy Blood Mini Kit，专门针对血液样本优化，提取的RNA纯度较高。

二、按RNA种类分类

1. 总RNA提取

   • 目的：提取细胞或组织中的所有RNA，包括mRNA、rRNA、tRNA、小RNA等。

   • 常用方法：

     • Trizol试剂法：适合提取总RNA，操作简便，提取的RNA纯度较高。

     • 商业试剂盒法：如Qiagen的RNeasy Mini Kit，适合高通量提取，提取的RNA纯度和完整性较好。

2. mRNA提取

   • 目的：提取细胞或组织中的mRNA，用于研究基因表达、转录组分析等。

   • 常用方法：

     • 磁珠法：利用带有寡聚dT的磁珠，通过碱基互补配对原理，特异性结合mRNA的poly(A)尾，从而分离mRNA。

     • 商业试剂盒法：如Qiagen的Oligotex mRNA Mini Kit，操作简便，适合高通量提取。

3. 小RNA提取

   • 目的：提取细胞或组织中的小RNA（如miRNA、siRNA等），用于研究非编码RNA的功能。

   • 常用方法：

     • 专用试剂盒法：如Qiagen的miRNeasy Mini Kit，专门针对小RNA优化，提取的小RNA纯度和完整性较好。

     • 改良酚 - 氯仿抽提法：通过优化酚 - 氯仿抽提步骤，可以提取小RNA，但操作复杂，需要严格控制条件。