石蜡包埋（Paraffin Embedding）是组织学、病理学和生物学研究中常用的样本制备技术，主要用于将组织样本固定、脱水、透明化后浸入石蜡中，使其硬化并便于后续切片和观察。以下是详细介绍：
一、石蜡包埋的主要步骤
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组织固定
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目的：保存组织形态，防止腐败和自溶。
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常用固定剂：10%中性福尔马林（甲醛溶液）。
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时间：根据组织大小（通常数小时至24小时）。
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脱水
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目的：去除组织中的水分，为后续步骤做准备。
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方法：梯度酒精（如70%、80%、95%、100%酒精），每级浸泡1至数小时。
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透明化
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目的：用透明剂（如二甲苯）置换酒精，使组织透明并便于石蜡渗透。
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步骤：酒精与透明剂混合→纯透明剂浸泡。
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浸蜡
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目的：用熔化的石蜡（熔点通常56-58℃）替换透明剂，填充组织间隙。
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步骤：将组织置于液态石蜡中（60℃左右），浸泡数小时至过夜。
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包埋
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将浸蜡后的组织放入模具，倒入液态石蜡，冷却凝固成蜡块。
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注意：调整组织方向（如切面朝下），便于后续切片。
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二、石蜡包埋的优点
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保持组织结构：石蜡硬化后能较好支撑组织，避免切片时变形。
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长期保存：蜡块可室温长期保存（数年甚至更久）。
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兼容性强：适用于大多数组织（如动物、植物、临床病理标本）。
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薄切能力：可切出2-10微米的薄片，满足高分辨率观察需求（如显微镜、免疫组化）。
三、局限性
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高温影响：浸蜡步骤可能破坏热敏感蛋白或抗原（需特殊处理）。
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步骤繁琐：全程需数天，需严格控制时间与试剂浓度。
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有机溶剂风险：透明剂（如二甲苯）有毒，需通风防护。
四、应用场景
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病理诊断：肿瘤组织分析、活检样本处理。
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科研研究：组织形态学观察、免疫组织化学（IHC）、原位杂交（ISH）。
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教学标本：制作长期保存的教学切片。
五、注意事项
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组织大小：厚度建议不超过5mm，避免固定/脱水不彻底。
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试剂更换：脱水剂和透明剂需定期更换以防污染。
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温度控制：浸蜡时石蜡温度过高可能损伤组织。
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替代方案：对热敏感样本可采用冷冻包埋（OCT包埋剂）。
六、常见问题与解决
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切片碎裂：可能因脱水不彻底或石蜡渗透不足。
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组织收缩：酒精浓度梯度骤变导致，需逐步脱水。
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抗原修复：石蜡包埋后可能需抗原修复步骤（如柠檬酸缓冲液加热）。
石蜡包埋是经典的组织制备方法，尽管步骤复杂，但其稳定性和兼容性使其在生物医学领域不可替代。现代技术（如自动化包埋机）进一步提高了效率和一致性。
